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ELISA 标准曲线制作方法

ELISA 标准曲线制作方法

发布时间:2019-03-12

一般而言,我们拟合 ELISA 标准曲线选用比较经典的 Curve Expert 1.3 或者 Curve Expert 1.4 软件。现在我们以 Curve Expert 1.4 为例,对 ELISA 标准曲线绘制方法进行详述。

1. 点击 Curve Expert 1.4,打开应用程序,截图界面如下


2. 在 X 轴输入标准品的 OD 值,Y 轴输入相应的标准品的浓度,截图界面如下
 

3. 单击上图界面中的图标,出现如下界面
 

4. 单击上图界面中的 ALL OFF 按钮,出现如下界面


5. 我们选择 Sigmoidal Models 这种曲线拟合模型进行 ELISA 标准曲线的拟合,点击 OK,出现下图界面


注意:上图界面中的 r 值越高,即当 r 值越接近 1 时,所拟合的曲线就越好,所得到的数值可靠性也就也高。

6. 在上图空白界面,按 [Ctrl] 键+[L] 键,出现如下界面
 
 

在上图中输入相应的 OD 值(X 值)后,点击 Calculate 即可计算出待测物的浓度(Y 值),待测物稀释了多少倍就在所测值的基础上乘以稀释倍数即最终浓度。

7. 点击所绘制的曲线图中左上方按钮,可以得到如下 ELISA 曲线拟合方程


 
8. 点击上图中 Copy 即可得到上图界面中的曲线方程数据
Logistic Model: y=a/(1+b*exp(-cx))
Coefficient Data:
a =    -1.19763443774E+004
b =    -8.45403498052E+001
c =    1.30213993104E+000

在使用 ELISA 法来检测蛋白浓度的时候,需要使用到如上的 ELISA 标准曲线制作方法,希望对您的工作有所帮助。