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常用的电泳缓冲液有哪些,如何配制.

常用的电泳缓冲液有哪些,如何配制.

发布时间:2019-11-18

       电泳缓冲液是核酸、蛋白质凝胶电泳系统的一个重要组成,是电泳场中的导体,也是维持电泳系统恒定 pH值的必要条件。它是指在进行分子电泳时所使用的缓冲溶液,用以稳定体系酸碱度。常见的核酸电泳缓冲液有:TAE、TBE、TPE和MOPS等。

 

电泳缓冲液的作用

   缓冲液在电泳过程中的一个作用是维持合适的pH。电泳时阳极与阴极都会发生电解反应,阳极发生的是氧化反应(4OH--4e->2H2O+O2),阴极发生的是还原反应(4H++4e->2H2),长时间的电泳将使阳极变酸,阴极变碱。一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力,使溶液两极的pH保持基本不变。

 

    电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性,以利于DNA分子的迁移,例如,一般电泳缓冲液中应含有0.01-0.04mol/L的Na+离子,Na+离子的浓度太低时电泳速度变慢;太高时就会造成过大的电流使胶发热甚至熔化。

 

     电泳缓冲液还有一个组分是EDTA,加入浓度为1-2mmol/L,目的是螯合Mg2+等离子,防止电泳时激活DNA酶,此外还可防止Mg2+离子与核酸生成沉淀。

 

电泳缓冲液的配制方法

1、MOPS

MOPS Buffer,即3-吗啉丙磺酸缓冲液,属于生物缓冲剂,可作为二维凝胶电泳中等电聚焦电泳(IEF)的电解质系统成分;还可应用于Northern杂交,作为RNA的分离和转膜时的缓冲液。

 

常用的10×MOPS Buffer配制方法如下:

(1)称量41.8 g MOPS,溶解于约700mL DEPC处理水中;

(2)使用2 N NaOH 调节pH值至7.0;

(3)向溶液中加入DEPC处理的1M NaOAC 20mL、0.5M EDTA(pH8.0) 20mL;

(4)定容至1 L,用0.45 μm 滤膜过滤除去杂质,室温避光保存。

 

2、TAE

TAE是使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量(TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量),且双链线状DNA在其中的迁移率较其他两种(TAE和TBE)缓冲液快约10%,电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果,此外,回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。

 

50×TAE Buffer 配制方法:

1。称量Tris 242g,EDTA 18.612g于1L烧杯中;

2。向烧杯中加入约800ml去离子水,充分搅拌均匀;

3。加入57.1ml的冰乙酸,充分溶解;

4。用NaOH调pH至8.3,加去离子水定容至1L后,室温保存。

使用时稀释50倍或100倍 即1×TAE Buffer 或 0.5×TAE。

 

3、TBE

TBE(Tris硼酸),是一种PCR技术中用到的缓冲液。

 

TBE配方:

1、使用液(0.5×)

0.045mol/L Tris-硼酸 0.001mol/L EDTA 采用无菌水溶解混匀,溶液体积为1L。

2、浓贮存液(5×)

54**is碱 27.5g硼酸 20ml 0.5mol/L EDTA 采用无菌水溶解混匀,NaOH调pH至8.0,溶液体积1L。



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